Тест ELISA выявляет множество заболеваний, поэтому он нашел широкое применение в медицине и не только. Тем не менее, тест ELISA наиболее известен своей диагностикой болезни Лайма. Что такое тест ELISA? Как интерпретировать результаты? Сколько стоит тест?
Оглавление:
- ИФА - что он определяет? Применение теста ELISA
- ИФА - что такое тест?
- ИФА и болезнь Лайма - когда проводить?
- ИФА - цена. Сколько стоит тест ELISA?
- ИФА - результаты. Могут ли они быть ложными?
- ИФА - результаты. Могут ли они быть ложноотрицательными?
Тест ELISA, то есть иммуноферментный анализ, является широко используемым лабораторным методом, который служит, среди прочего, для количественного определения антител в крови.
По этой причине тест ELISA нашел применение в диагностике бактериальных заболеваний, таких как боррелиоз Лайма.
Достоинством метода ELISA является его простота и возможность быстрой реализации, а также высокая чувствительность. Метод ELISA выполняется с использованием специальных пластиковых планшетов с лунками, заполненными, например, белками (антигенами) Borrelia и специфическими моноклональными антителами, которые предназначены для обнаружения антител в образце пациента.
ИФА - что он определяет? Применение теста ELISA
Высокая чувствительность и простота метода ELISA сделали его применимым для диагностики многих заболеваний, но наиболее известен он как метод диагностики болезни Лайма.
В случае диагноза Лайм-боррелиоз так называемый непрямой ИФА, позволяющий выявить специфические IgM или IgG в исследуемом материале. Таким же образом можно обнаружить антитела для диагностики:
- вирусные инфекции: вирусы герпеса (герпес, опоясывающий герпес, вирус Эпштейна-Барра, цитомегаловирус), ВИЧ, вирусы гепатита (HBV и HCV)
- протозойные инфекции: токсоплазмоз, лямблиоз
- аутоиммунные заболевания: целиакия (антитела против ТТГ или ДПГ), болезнь Хашимото (антитела против ТГ и ТПО), воспалительные заболевания кишечника (антитела против ASCA и против ANCA)
- паразитарные заболевания и аллергии, при которых выявляются специфические антитела IgE. Их повышенный уровень может указывать на наличие аллергии, например, на пыльцу и пищу, или на паразитарное вторжение (вооруженный цепень, человеческий аскарид).
Существуют также модификации метода ELISA (так называемый сэндвич-ELISA), которые позволяют обнаруживать образцы белков, отличных от антител. Тогда цель теста - обнаружить в биологическом материале:
- фрагменты вирусов или бактерий, чаще всего это антигены, характерные для данного возбудителя
- гормоны сыворотки, например эстроген, пролактин, ТТГ, fT4, кортизол
- ферменты, например кальпротектин, панкреатическая эластаза, щелочная фосфатаза
- онкомаркеры, например CA-125
- наличие препаратов в сыворотке крови
Этот метод также применим в пищевой промышленности, где он может обнаруживать следы аллергенов (например, молока, арахиса), ГМО или токсинов в продуктах питания.
ИФА - о чем он?
Диагностика, например, боррелиоза Лайма с помощью метода ELISA заключается в обнаружении иммунных белков в биологическом материале - антител, которые возникают во время реакции против антигенов боррелий.
Антитела тестируются в двух классах: IgM и IgG. IgM - это первые антитела, которые появляются в организме при контакте с бактериями, и со временем их количество уменьшается.
Их место занимают более стойкие антитела IgG, которые могут оставаться в организме несколько десятков лет.
Таким образом, наличие бактерий в организме косвенно проверяется путем обнаружения антител, специфически направленных против спирохет Borrelia.
Антитела на различных стадиях инфекции могут быть направлены против различных белков Borrelia. Например, на ранней стадии это белок p41.
На более поздних стадиях начинает появляться все больше и больше белков, таких как p21, p30, p39, p43. Вот почему диагностировать болезнь Лайма крайне сложно.
Выбор бактериальных белков чрезвычайно важен для того, чтобы тест имел высокую диагностическую ценность. Таким образом, при диагностике болезни Лайма обычно следует использовать ELISA-тесты II или III поколения, в которых для получения наиболее надежного результата выбираются наборы белков.
ИФА и болезнь Лайма. Когда делать?
Лайм-боррелиоз - это бактериальное заболевание, вызываемое бактериями Borrelia burgdorferi и их многочисленными разновидностями.
Диагностировать заболевание непросто из-за сложности иммунного ответа против боррелий и несовершенства лабораторных методов.
Наиболее часто используемый лабораторный метод - это высокочувствительный метод ELISA, который обнаруживает специфические антитела, вырабатываемые против бактериальных белков.
В диагностике болезни Лайма используется непрямой метод ИФА, в котором выделяют следующие стадии:
- инкубация лунок на планшете с материалом, взятым у пациента, например сывороткой. Если в исследуемом материале есть антитела против боррелий, они связываются с белками на дне реакционной лунки.
- затем излишки сыворотки смываются специальной промывочной жидкостью (буфером) и так называемым конъюгат, который представляет собой связанное с ферментом антитело, которое связывается с ранее связанными антителами в реакционных лунках
- затем добавляется субстрат для конъюгата и возникает цветная реакция (положительный результат) или цветная реакция отсутствует (отрицательный результат)
- последний шаг - считывание ридером (спектрофотометром) концентрации антител против боррелий в сыворотке крови пациента.
ELISA-анализ на болезнь Лайма проводится по крови, а в случае неврологических симптомов (нейроборрелиоз) - также из спинномозговой жидкости.
Синовиальную жидкость не следует анализировать, так как высока вероятность получения ложноположительных результатов.
Основанием для диагностики заболевания служат указывающие на него клинические симптомы, подтвержденные результатами лабораторных исследований.
Добавление результата лабораторного теста без симптомов не дает права на диагностику болезни Лайма, поскольку было показано, что антитела к боррелии также обнаруживаются у здоровых людей.
Серологическая диагностика боррелиоза Лайма начинается с полуколичественного скринингового теста ELISA. Если результат отрицательный, это означает, что спирохеты Borrelia не обнаружены или результат ложноотрицательный.
Если результат положительный или слабо положительный (сомнительный), следует провести подтверждающий вестерн-блоттинг, который характеризуется высокой специфичностью.
Это подтверждает «правдивость» результатов, полученных методом ELISA. Во время диагностики нельзя пропустить ни один из вышеперечисленных шагов и, например, сразу же провести диагностику методом вестерн-блоттинга или поставить диагноз только на основании положительного результата ELISA.
В Польше диагностика болезни Лайма очень часто заканчивается на первом этапе скрининга, что приводит к неверной интерпретации положительных или слабоположительных результатов.
Рекомендуемая статья:
Тест трансформации лимфоцитов (LTT) Полезно знатьИФА - цена. Сколько стоит тест ELISA?
Тест стоит около 60 злотых и проводится сразу. Впрочем, результатов направления можно подождать около трех месяцев.
ИФА - результаты. Могут ли они быть ложными?
Ложноположительные результаты являются результатом перекрестной реактивности антител IgM с другими белками. Антитела, вырабатываемые организмом, могут «неправильно» распознавать антиген других микроорганизмов как антиген Borrelia.
Наиболее частые «ошибки» происходят у людей, инфицированных бледной трепонемой, герпесвирусами, а также у людей с системной красной волчанкой и другими ревматическими заболеваниями.
ИФА - результаты. Могут ли они быть ложноотрицательными?
Ложноотрицательные результаты могут появиться на ранней стадии заражения, и в этом случае тест следует повторить примерно через 3-4 недели. Это называется серологическое окно, то есть начальный период инфекции, в котором организм еще не «успел» произвести специфические антитела.
То же самое касается людей с иммунодефицитом, которые не вырабатывают достаточно антител.
Большой проблемой, особенно при очень интенсивных инфекциях, является появление так называемого иммунные комплексы, состоящие из антигенов Borrelia spirochetes и специфических к ним антител.
В результате антитела становятся «невидимыми» для широко используемых методов, таких как ELISA, и, хотя они присутствуют в тестируемом материале, их нельзя обнаружить.
В таких случаях лаборатория может использовать разрушающие иммунные комплексы. Это лечение предназначено для высвобождения антител. Однако этот метод не получил широкого распространения из-за отсутствия стандартизации в лабораториях.
Стоит знатьПочему нелегко диагностировать болезнь Лайма?
Это связано со сложностью иммунного ответа против боррелий и ограничениями лабораторных методов. Разнообразие разновидностей и появление новых, вызывающих инфекции, особенно на европейском континенте, не способствует развитию эффективных методов диагностики.
В последнее время в Европе появилось больше разновидностей, таких как Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana и Borrelia spielmanii. Кроме того, в организме спирохеты Borrelia могут превращаться в цисты или оставаться в местах тела, недоступных для клеток иммунной системы.
Таким образом, будучи «невидимым» для иммунной системы. Кроме того, было показано, что ткани могут содержать фрагменты бактерий, которые обладают сильными провоспалительными свойствами. Считается, что они ответственны за хронические симптомы болезни Лайма, несмотря на отрицательные результаты лабораторных исследований.
Литература
1. Witecka-Knysz E. и др. Болезнь Лайма: почему так сложно диагностировать? Лабораторный диагност апрель 2007 г.
2. Мур А. и др. Текущие рекомендации, общие клинические ошибки и будущие направления лабораторной диагностики болезни Лайма, США. Emerg Infect Dis. 2016 июл; 22 (7).
3. Лабораторная диагностика клещевых заболеваний. Рекомендации рабочей группы: Национальная палата лабораторных диагностов, Национальный институт общественного здравоохранения - Национальный институт гигиены, Национальный консультант в области инфекционных заболеваний, Отделение инфекционных заболеваний и нейроинфекций, Медицинский университет Белостока, Польское общество вирусологии, Варшава, 2014 г.
4. Хоссейни С. и др.: Иммуноферментный анализ (ИФА) от А до Я. Springer 2017.
